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HTRF VEGFR2 TOTAL KIT - 10K PTS

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品牌： Revvity

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概述

用于监测总血管内皮生长因子受体 2（VEGFR2）调控的均相细胞检测法。VEGFR2 介导的信号数据可应用于血管生成、血管通透性及癌症干细胞调控研究。

工作原理

总 VEGFR2 检测原理

总 VEGFR2 检测可对 VEGFR2 进行定量分析。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 VEGFR2 检测使用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用 “无需洗涤” 的形式，为评估蛋白质的磷酸化状态提供了便利。

磷酸化平板检测方案

总 VEGFR2 双板检测方案
双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，最后加入总 VEGFR2 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

磷酸化检测工作原理

总 VEGFR2 单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测总 VEGFR2 可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

磷酸化总 FGFR

检测验证

胰岛素对人脐静脉内皮细胞（Huvec）的磷酸化和总 VEGFR2 检测的剂量反应效应

将 Huvec 细胞以每孔 150,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下过夜孵育后，向细胞中加入一系列稀释的人血管内皮生长因子（VEGF），并在 37°C、5% CO₂条件下孵育 3 分钟。移除刺激培养基，加入 50µL 裂解缓冲液。进行裂解步骤，轻轻振荡 30 分钟。将 16µL 样品转移到 384 孔小体积板中，然后加入 4µL 磷酸化 VEGFR2 HTRF 检测试剂。同时，将 16µL 样品分装到其他孔中，再加入 4µL HTRF 总 VEGFR2 检测试剂。信号记录持续过夜。

检测验证

总 VEGFR2 检测与蛋白质印迹法的比较
将人 Huvec 细胞培养至 80% 汇合度。用 hVEGF 处理 3 分钟后，裂解细胞，通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 各稀释液转移到 384 孔小体积白色微孔板中，最后加入 VEGFR2 细胞检测试剂盒的检测试剂。

平行比较显示，HTRF 总检测法的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 32 倍。

检测验证

简化通路

血管内皮生长因子（VEGF）是一种内皮细胞特异性有丝分裂因子，常与肿瘤诱导的血管生成激活相关。在肿瘤中，VEGF 的分泌会上调。在 endothelial 细胞表面，分泌的 VEGF 蛋白可高亲和力结合至少两种不同的血管内皮生长因子受体（VEGFRs），即 VEGFR-1（也称为 fms 样酪氨酸激酶，Flt-1）和 VEGFR-2（也称为胎儿肝激酶，Flk-1）。

VEGF 激活内皮细胞后，会导致受体自身磷酸化并启动后续信号传导。目前已发现多个磷酸化位点。

VEGFR 与血管生成有关，联合抑制 VEGF 和 PDGF 信号可促进肿瘤血管消退。

磷酸化通路

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 4、裂解缓冲液 5
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术原理：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域：心血管疾病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症
单位规格：10,000 个检测点

没有数据

货号：64VEGFR2TPEH

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