品牌: Revvity
概述
HTRF磷酸化α-突触核蛋白(Ser129)细胞检测试剂盒是定量内源性在丝氨酸129位磷酸化的磷酸化α-突触核蛋白的理想选择。 α-突触核蛋白参与突触核蛋白病的发病机制,突触核蛋白病是一组神经退行性疾病,包括帕金森病(PD)、路易体痴呆(DLB)、弥漫性路易体病(DLBD)和多系统萎缩(MSA)。工作原理
磷酸化-突触核蛋白(Ser129)检测原理 磷酸化α-突触核蛋白(Ser129)检测可测量在丝氨酸129位磷酸化的突触核蛋白。与蛋白质印迹法不同,该检测完全基于微孔板,无需凝胶、电泳或转膜步骤。 磷酸化-突触核蛋白(Ser129)检测使用两种标记抗体:一种带有供体荧光团,另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序,第二种抗体则能识别该蛋白质而不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物,使供体荧光团与受体荧光团接近,从而产生FRET信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比,且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。 磷酸化α-突触核蛋白(Ser129)双板检测方案 双板方案包括在96孔板中培养细胞,裂解后将裂解物转移至384孔小体积检测板,然后加入磷酸化α-突触核蛋白(Ser129)HTRF检测试剂。 该方案能够监测细胞活力和汇合度。 磷酸化α-突触核蛋白(Ser129)单板检测方案 使用HTRF试剂检测磷酸化α-突触核蛋白(Ser129)可在单个培养板中完成,该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解,无需洗涤步骤。 此高通量筛选设计方案可实现小型化,同时保持稳定的HTRF检测质量。检测验证
人源样品中α-突触核蛋白在丝氨酸129位的磷酸化 将编码α-突触核蛋白的质粒转染HEK293细胞,接种后用非磷酸化原纤维处理。细胞裂解后,通过HTRF分析不同稀释度的裂解物。 在路易体病患者的人脑匀浆中检测到了α-突触核蛋白的磷酸化。 小鼠样品中α-突触核蛋白在丝氨酸129位的磷酸化 在野生型小鼠的原代神经元中检测到了α-突触核蛋白的磷酸化。 经非磷酸化原纤维处理的诱导型重组小鼠N2A细胞中,α-突触核蛋白呈现高磷酸化水平。简化通路
帕金森病通路与α-突触核蛋白的作用 α-突触核蛋白是突触核蛋白病患者脑内细胞内纤维状聚集体的主要成分。该蛋白质是帕金森病、路易体痴呆或多系统萎缩的关键分子标志物。α-突触核蛋白在丝氨酸129位的广泛磷酸化也与病理过程相关。规格
其他规格 应用 细胞信号传导 品牌 HTRF 检测方式 HTRF 裂解缓冲液兼容性 裂解缓冲液1 裂解缓冲液2 裂解缓冲液3 裂解缓冲液4 裂解缓冲液5 分子修饰 磷酸化 产品类别 试剂盒 样品体积 16 µL 运输条件 干冰运输 目标类别 磷酸化蛋白质 目标物种 人 小鼠 技术 时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET) 治疗领域 神经科学 单位规格 500个检测点