已知 G 蛋白偶联受体(GPCR)Gq 的激活会诱导磷脂酶 C(PLC)活化,并触发肌醇磷酸(IP)级联反应。
IP1 是 IP3 的下游代谢产物,在 Gq 受体激活后会在细胞内积累,且在氯化锂(LiCl)存在时保持稳定,使其成为理想的 GPCR(Gq)功能检测指标。
Revvity 公司开发了一种基于单克隆抗体的 IP-One ELISA 检测方法,可实现对 IP1 的简便且高精度测量。
IP-One ELISA 是一种竞争性免疫检测方法,使用 IP1 - 辣根过氧化物酶(IP1-HRP)和抗 IP1 单克隆抗体。该试剂盒配备预包被抗小鼠抗体的 96 孔微孔板。在 LiCl 存在的情况下刺激细胞,受体激活后会导致 IP1 积累。细胞刺激后的实验流程包括两个步骤:添加 ELISA 组分以及添加辣根过氧化物酶底物 TMB。终止辣根过氧化物酶反应后,在 450nm 处读取光密度(OD)。
IP1 是 IP3 的下游代谢产物,在 Gq 受体激活后在细胞内积累。
它在 LiCl 存在时保持稳定,非常适合用于 GPCR(Gq)功能检测。
- 检测限:10 nM
- 动态范围:10-3000 nM
- 半最大效应浓度(EC50):110 nM
- 特异性:与 50 µM 肌醇、PIP2、IP2、IP3、IP4 或 PIP3 无交叉反应
Cisbio IP-One ELISA 与细胞裂解物兼容,可用于活细胞功能检测。
在进行 IP-One ELISA 检测步骤之前,可使用多种板型对细胞进行刺激。
该图显示了在 24 孔板或 96 孔板中刺激的细胞上进行 IP-One ELISA 的结果。裂解细胞后,将其转移到试剂盒提供的 ELISA 板中。在 96 孔板中,每孔使用 80,000 个细胞;在 24 孔板中,每孔使用 400,000 个细胞。
两种细胞刺激格式产生的结果相似,且标准偏差较低。
- 应用领域:第二信使检测
- 检测方式:酶联免疫吸附测定(ELISA)
- 动态范围:10-3000 nM
- 检测限:10 nM
- 产品类别:试剂盒
- 样品体积:50 µL
- 运输条件:常温运输
- 靶标类别:G 蛋白偶联受体(GPCR)
- 技术:酶联免疫吸附测定(ELISA)
- 治疗领域:心血管疾病、传染病、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
- 单位规格:96 个检测点