HTRF PSNAP-AT2 ANGIOTENSIN RECEPTOR Tag-lite 血管紧张素2型受体克隆质粒

概述

过去几年中，SNAP标签技术与时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）相结合，为多种非放射性、无需洗涤的结合测定方法的开发奠定了基础。该方法基于使用编码SNAP标签的质粒转染细胞，随后用铽（Terbium）对其进行标记。 Cisbio提供大量此类质粒。所有G蛋白偶联受体（GPCR）基因均克隆到CMV启动子下游的表达载体中，可直接用于蛋白质表达和标记。 本页面上的所有信息均与克隆了AT2血管紧张素受体的Tag-lite质粒相关。工作原理

步骤1 - 质粒转染 使用标准转染技术（参考瞬时转染方案）在您的细胞系中瞬时表达目标SNAP-GPCR。 步骤2 - 受体标记 SNAP标签®是一种小型融合标签，可与特定底物发生共价相互作用。它能够对任何目标蛋白质进行特异性共价标记（参考标记步骤）。提供的细胞未经过标记，在进行结合测定前需要用Lumi4-铽进行标记。Revvity产品目录中提供4种不同包装规格的标记试剂。 步骤3 - 了解测定原理 使用Tag-lite进行受体结合测定非常简便。只需向每个孔中加入10 µL标记细胞，然后加入5 µL标记配体和5 µL您想要测试的化合物即可。与所有HTRF测定一样，Tag-lite测定无需任何洗涤步骤。右侧给出了应遵循的操作流程示意图。 步骤4 - 饱和结合（KD） 饱和结合测定用于在平衡条件下，针对浓度不断增加的配体，测量总结合和非特异性结合。进行该测定时，将荧光配体滴定到含有一定量标记细胞的溶液中，然后孵育至平衡。通过该滴定获得的HTRF比值即为总结合。 步骤5 - 竞争性结合（KI） 竞争性结合测定用于测量解离常数（Ki）。进行该测定时，将化合物滴定到含有固定浓度荧光配体和固定数量细胞的溶液中。规格

其他规格 应用 受体-配体结合 品牌 HTRF 检测方式 HTRF 产品类别 质粒 运输条件 干冰运输 靶标类别 G蛋白偶联受体（GPCR） 技术 时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET） 单位规格 1瓶