assay-validation-inhibitor-phospho-t210-plk1-64plkt2peg(图示:磷酸化 PLK1(苏氨酸 210 位点)抑制剂检测验证)
将贴壁生长的人源细胞(HeLa、MCF7、Hep-G2)和鼠源细胞(NIH 3T3)以每孔 25,000 个细胞的密度接种到 96 孔微孔板中。孵育 24 小时后,用 300 纳摩尔诺考达唑(Nocodazole)处理细胞,在 37°C 条件下孵育 16 小时。随后用补充后的 1 号裂解缓冲液裂解细胞,取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板,再加入 4 微升磷酸化 PLK1(苏氨酸 210 位点)均相时间分辨荧光(HTRF)检测试剂。孵育过夜后,记录均相时间分辨荧光(HTRF)信号。
结果显示,均相时间分辨荧光(HTRF)磷酸化 PLK1(苏氨酸 210 位点)检测可在表达不同水平该蛋白的多种细胞模型中有效检测磷酸化 PLK1。
assay-validation-versatility-phospho-t210-plk1-64plkt2peg(图示:磷酸化 PLK1(苏氨酸 210 位点)多细胞系检测验证)
将 HeLa 细胞接种到 T175 培养瓶中,加入完全培养基,在 37°C、5% 二氧化碳条件下培养 24 小时。随后用 300 纳摩尔诺考达唑(Nocodazole)处理细胞,在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 16 小时。接着加入 3 毫升补充后的 1 号裂解缓冲液(1 倍浓度),在室温下轻柔振荡裂解 30 分钟。
用补充后的 1 号裂解缓冲液(1 倍浓度)对细胞裂解液进行系列稀释,取 16 微升各稀释度裂解液转移至小体积白色微孔板,再加入 4 微升磷酸化 PLK1(苏氨酸 210 位点)均相时间分辨荧光(HTRF)检测试剂。
取等量裂解液,通过蛋白质印迹法(Western Blot)与均相时间分辨荧光(HTRF)法进行平行对比检测。
结果显示,在此实验条件下,均相时间分辨荧光(HTRF)磷酸化 PLK1 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 32 倍。
assay-validation-wb-comparison-phospho-t210-plk1-64plkt2peg(图示:磷酸化 PLK1(苏氨酸 210 位点)检测与蛋白质印迹法比较验证)
PLK1(Polo 样激酶 1)在有丝分裂进程中发挥关键作用,近期研究表明,它还在 G2/M 检查点调控、DNA 损伤与复制应激反应及细胞死亡通路中具有重要作用。其信号传导机制较为复杂,涉及多个正反馈环路(如 Bora/AuroraA 通路)和负反馈环路(如 CHK1/ATR 或 CHK2/ATM 通路)。
PLK1 在细胞周期调控中的激活机制:PLK1 可被 AurA 激酶磷酸化苏氨酸 210 位点而激活,激活后的 PLK1 会进一步磷酸化 CDC25。
在自噬 / 凋亡过程中,PLK1 通过多种信号通路(包括 mTOR、c-myc 和 p53 通路)参与多种细胞死亡过程。
近期文献报道了 PLK1 的新功能 —— 参与炎症和免疫反应调控,包括 NF-κB 和 RIG-I/MAV 信号通路。
上述所有生物学过程在肿瘤中均会发生异常改变,且研究发现 PLK1 在多种肿瘤类型中常呈高表达状态,而这种高表达与患者预后不良相关。因此,靶向 PLK1 已成为一种极具潜力的抗癌治疗策略。
pathway-phospho-t210-plk1-64plkt2peg(图示:PLK1 信号通路)
- 应用领域:细胞信号通路研究
- 品牌:均相时间分辨荧光(HTRF)
- 检测方式:均相时间分辨荧光(HTRF)
- 裂解缓冲液兼容性:1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液
- 分子修饰类型:磷酸化
- 产品类别:试剂盒
- 样本体积:16 微升
- 运输条件:干冰运输
- 靶点类别:磷酸化蛋白
- 靶点物种:人、小鼠
- 技术平台:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
- 单位规格:10000 次检测