产品概述

脑源性神经营养因子（BDNF）属于神经营养因子家族，该家族还包括神经生长因子（NGF）、神经营养因子 3（NT-3）和神经营养因子 4（NT-4）。BDNF 是健康或患病大脑中研究最广泛的神经营养因子之一，由神经元和神经胶质细胞分泌，受多种内源性和外源性刺激（如压力、体力活动、脑损伤、饮食）的强烈调控。BDNF 在调控神经元和神经胶质细胞发育、神经保护以及突触相互作用中发挥关键作用，而这些过程对认知和记忆至关重要。BDNF 水平降低与帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化症和亨廷顿舞蹈症等神经退行性疾病相关。

工作原理

检测原理

BDNF 的检测采用双抗夹心免疫分析技术，使用两种特异性抗 BDNF 抗体，分别标记 HTRF 供体染料和受体染料。信号强度与样本中 BDNF 的浓度直接成正比。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-principle-bdnf-62bdnfpeg-62bdnfpeh 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - BDNF 检测原理”）

检测方案

检测采用 384 孔小体积白色板或 Revvity 低体积 96 孔板（最终反应体积 20 µL），操作流程如下：向检测板中直接加入 16 µL 细胞上清液或标准品，随后使用 HTRF 试剂进行检测。标记 HTRF 供体和受体的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，进一步简化检测流程。仅需按比例调整各试剂的添加体积，检测即可在 96 孔至 384 孔板中进行。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-bdnf-62bdnfpeg-62bdnfpeh 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - BDNF 检测方案”）

检测详情

试剂盒技术规格

• 样本量：16 µL
• 最终检测体积：20 µL
• 出结果时间：室温过夜（Overnight at RT）
• 试剂盒组分：冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及实验方案
• 检测限（LOD）与定量限（LOQ）（稀释液中）：5 pg/mL 与 31 pg/mL
• 检测范围：31–5000 pg/mL
• 校准公式：NIBSC（96/534）值（IU/mL）= 0.0012 × HTRF BDNF 值（pg/mL）
• 适用物种：人、小鼠、大鼠、牛、猪、犬
• 特异性：不识别 NGF、NT-3 和 NT-4

分析性能

BDNF 标准曲线

按照试剂盒说明书流程，将试剂盒提供的重组 BDNF（标准品）用 5 号稀释液进行系列稀释。以检测得到的 HTRF 信号（以 delta 比值表示）为纵坐标，对应的 BDNF 浓度为横坐标绘制标准曲线。（标注：analytical-performance-bdnf-1 为图表 / 文件标识，可译为 “BDNF 分析性能 1”）

精密度

批内精密度（n=24）

• 每个样本检测 24 次，计算各样本的变异系数（% CV）
• 样本 1：BDNF 浓度 90 pg/mL，变异系数（CV）4%
• 样本 2：BDNF 浓度 2500 pg/mL，变异系数（CV）9%
• 样本 3：BDNF 浓度 4500 pg/mL，变异系数（CV）4%
• 平均 CV：5.7%

批内精密度（n=5）

• 每个样本在 5 个不同实验中检测，计算各样本的变异系数（% CV）
• 样本 1：BDNF 浓度 78 pg/mL，变异系数（CV）9%
• 样本 2：BDNF 浓度 312 pg/mL，变异系数（CV）7%
• 样本 3：BDNF 浓度 1250 pg/mL，变异系数（CV）4%
• 平均 CV：6.7%

加标回收

• 样本 1：细胞上清液中 BDNF 浓度 21 pg/mL，添加重组 BDNF 124 pg/mL，预期总浓度 145 pg/mL，实测总浓度 147 pg/mL，回收率 101.4%
• 样本 2：细胞上清液中 BDNF 浓度 453 pg/mL，添加重组 BDNF 334 pg/mL，预期总浓度 787 pg/mL，实测总浓度 812 pg/mL，回收率 103.2%
• 样本 3：细胞上清液中 BDNF 浓度 1335 pg/mL，添加重组 BDNF 408 pg/mL，预期总浓度 1743 pg/mL，实测总浓度 1730 pg/mL，回收率 99.3%

检测验证

IFN-γ 处理人小胶质细胞系 HMC3

将人小胶质细胞系 HMC3 以 3×10⁶个细胞接种到 T75 培养瓶中，使用完全培养基培养至汇合度达 80%。随后用 10 ng/mL 人 IFN-γ 处理细胞（或不处理），孵育 24 小时。收集细胞上清液，按照 HTRF 试剂盒说明书流程检测 BDNF 的分泌水平。结果与文献报道一致，经 IFN-γ 处理的小胶质细胞，其 BDNF 释放量降低。（标注：Assay-validation-bdnf-1 为图表 / 文件标识，可译为 “BDNF 检测验证 1”）

促炎细胞因子处理人诱导多能干细胞（hiPSC）来源星形胶质细胞 Astro.4U

将人诱导多能干细胞来源的星形胶质细胞（Astro.4U®，Ncardia）接种到经多聚 L - 鸟氨酸 / 层粘连蛋白包被的 96 孔板中，培养 7 天。随后用人类促炎细胞因子混合物（10 ng/mL TNF-α + 100 ng/mL IL-1β + 100 ng/mL IFN-γ）处理细胞（或不处理），孵育 24 小时。收集细胞上清液，按照 HTRF 试剂盒说明书流程检测 BDNF 的分泌水平。结果符合预期，当星形胶质细胞暴露于促炎细胞因子混合物时，其释放的 BDNF 浓度显著升高。（标注：assay-validation-bdnf-2 为图表 / 文件标识，可译为 “BDNF 检测验证 2”）

简化通路

BDNF 简化通路

星形胶质细胞对环境非常敏感，能对中枢神经系统（CNS）损伤快速做出反应，激活的信号通路会使其呈现促炎或抗炎表型。在某些细胞因子和生长因子的作用下，星形胶质细胞会激活 Jak/STAT3 通路。该通路被认为可上调并分泌多种神经营养因子和神经保护因子，促进神经元存活和突触修复，BDNF 便是其中之一。（标注：biomarkers-tab4-bdnf-simplified-pathway-62bdnfpeg-62bdnfpeh 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - BDNF 简化通路”）

产品规格

其他规格

• 应用领域：Protein Quantification（蛋白定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：Kit（试剂盒）
• 样本体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：Biomarkers（生物标志物）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：Neuroscience（神经科学）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）