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人血红素氧合酶 1(HO-1)是一种催化血红素降解的酶,可产生胆绿素、亚铁离子和一氧化碳。HO-1 是应激诱导型同工酶,氧化应激、缺氧、重金属、细胞因子等多种应激条件均可诱导其表达。该人 HO-1 试剂盒可快速监测细胞产生的 HO-1 水平。
人 HO-1 的检测采用夹心免疫分析技术,涉及两种特异性抗人 HO-1 抗体:一种标记铕穴状化合物(Europium Cryptate,供体),另一种标记 d2(受体)。信号强度与样本中 HO-1 的浓度呈正比。(标注:human-heme-oxygenase-kit 为图表标识,对应 “人 HO-1 检测原理”)
该试剂盒采用双板实验方案:细胞在同一培养板中接种、刺激并裂解,随后将裂解液转移至检测板进行人 HO-1 检测。该方案可监测细胞活力与汇合度。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合,单次加样简化操作流程;按比例调整试剂体积即可适配 96 孔至 384 孔板格式。(标注:human-heme-oxygenase-kit 为图表标识,对应 “人 HO-1 检测流程”)
以 25 ng/mL 人 HO-1 蛋白为起始浓度进行两倍系列稀释,采用四参数逻辑(4PL)模型拟合(权重 1/Y²)。注:本数据仅为示例,不可替代实验室实测数据。(标注:human-heme-oxygenase-kit 为图表标识,对应 “人 HO-1 标准曲线”)
将 HEPG2 细胞以 50,000 个细胞 / 孔接种,在含或不含 10 µM 氯化镉的条件下刺激 6 小时。移除上清液后,使用试剂盒提供的裂解缓冲液裂解细胞,稀释 5 倍后加样,随后加入试剂盒中的标记抗体,4 小时后读取信号。结果显示,与未刺激细胞相比,HTRF 比值增加 2.9 倍,表明镉离子刺激后可诱导人 HO-1 的产生。(标注:human-heme-oxygenase-kit 为图表标识,对应 “HEPG2 细胞 HO-1 检测结果”)