产品概述

胰高血糖素（Glucagon）检测试剂盒具有超高灵敏度和易用性，可可靠定量细胞培养基中的胰高血糖素。该检测基于真正的均相实验方案，无需任何洗涤或复杂提取步骤，相比酶联免疫吸附试验（ELISA）大幅节省时间。操作流程简单：仅需添加检测试剂、孵育后读取结果即可。

工作原理

检测原理

胰高血糖素的检测采用双抗夹心免疫分析技术，使用两种单克隆抗体：一种标记 Lumi4-Tb 穴状化合物（Lumi4-Tb Cryptate，供体），另一种标记 d2（受体）。检测获得的荧光共振能量转移（FRET）信号强度与样本中胰高血糖素的浓度成正比。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-principle-glucagon-62cglpeg 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - 胰高血糖素检测原理”）

检测方案

向检测体系中加入 10 µL 细胞上清液，再添加 5 µL 受体标记抗体和 5 µL 供体标记抗体（或直接加入 10 µL 预混试剂，实现单次加样）。将混合物在室温下孵育 4 小时至过夜，随后用 HTRF 兼容读数仪读取结果。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-glucagon-62cglpeg-62cglpeh 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - 胰高血糖素检测方案”）

检测详情

特异性

• 胰高血糖素（Glucagon）：识别率 100%
• 胰泌素样肽（Oxyntomodulin）：识别率＜0.07%
• 胰高血糖素原（Glicentin）：识别率＜0.07%
• 胰高血糖素片段 1-18（Glucagon fragment 1-18）：识别率＜1.81%
• 胰高血糖素片段 19-29（Glucagon fragment 19-29）：识别率＜0.03%
• 胰高血糖素样肽 - 1（7-36）酰胺（GLP-1 (7-36) amide）：识别率＜0.06%
• 胰高血糖素样肽 - 1（7-37）（GLP-1 (7-37)）：识别率＜0.11%
• 胰高血糖素样肽 - 2（GLP-2）：识别率＜0.3%
• 胰高血糖素原相关胰肽（GRPP）：识别率＜0.01%

灵敏度

使用白色 384 孔小体积板，终体积 20 µL，将胰高血糖素标准品在细胞培养基条件下稀释，用 5 号稀释液处理后室温过夜孵育，可获得典型校准曲线。该检测的线性范围为 15.6-2000 pg/mL，检测限为 6 pg/mL（使用 PHERAstar FS 读数仪，闪光灯激发）。（标注：specifications-glucagon-1 为图表 / 文件标识，可译为 “胰高血糖素检测规格 1”）

线性

细胞培养基中的稀释线性已通过验证，回收率在 88%-100% 之间，证实该检测具有良好线性。相关实验流程：将小鼠 α-TC1-6 细胞以 1×10⁵个 / 孔接种到经培养处理的 96 孔板中，使用含 25mM 葡萄糖的完全培养基，在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 24 小时。去除培养基后，用 KRB 缓冲液洗涤孔板两次，再用含低浓度葡萄糖（1 mM）的 KRB 缓冲液孵育 1 小时。收集上清液，用 5 号稀释液进行系列稀释，结果以实测值与预期值的百分比表示。小鼠 α 细胞上清液用 5 号稀释液系列稀释的具体结果：

• 原液：实测胰高血糖素浓度 1460.0 pg/mL（无预期值）
• 1:2 稀释：实测 733.0 pg/mL，预期 730.0 pg/mL，符合率 100.4%
• 1:4 稀释：实测 351.0 pg/mL，预期 365.0 pg/mL，符合率 96.2%
• 1:8 稀释：实测 167.0 pg/mL，预期 182.5 pg/mL，符合率 91.5%
• 1:16 稀释：实测 80.3 pg/mL，预期 91.3 pg/mL，符合率 88.0%

（标注：specifications-glucagon-2 为图表 / 文件标识，可译为 “胰高血糖素检测规格 2”）

批内与批间变异

细胞培养基条件下的批内和批间变异已通过验证，典型变异系数（CV）均小于 5%，证明该检测具有稳健性和可重复性。

批内变异（n=24）

• 标准品 2（31.25 pg/mL）：CV 2.8%
• 标准品 6（500 pg/mL）：CV 2.4%
• 标准品 8（2000 pg/mL）：CV 3.0%

批间变异（n=6）

• 标准品 2（31.25 pg/mL）：CV 8.1%
• 标准品 6（500 pg/mL）：CV 4.4%
• 标准品 8（2000 pg/mL）：CV 5.4%

检测验证

小鼠分离胰岛的验证实验

分离 C57BL/6J 小鼠的 15 个胰岛，暴露于梯度浓度的葡萄糖或肾上腺素。处理后收集上清液，定量其中的胰高血糖素水平。结果显示，在葡萄糖存在的条件下，每孔仅需 15 个胰岛即可稳定检测到胰高血糖素，所有结果与其他研究者之前发表的数据一致。（致谢：法国蒙彼利埃功能基因组学研究所，胰岛 β 细胞病理生理学研究团队提供支持）（标注：assay-validation-glucagon-1 为图表 / 文件标识，可译为 “胰高血糖素检测验证 1”）

产品规格

其他规格

• 应用领域：Protein Quantification（蛋白定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：Kit（试剂盒）
• 样本体积：10 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：Biomarkers（生物标志物）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：Metabolism/Diabetes（代谢 / 糖尿病）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）