品牌: Revvity
皮质醇(Cortisol)又称氢化可的松,是肾上腺皮质分泌的主要糖皮质激素。它参与调控葡萄糖代谢、脂肪分解、血压水平及应激抑制过程。皮质醇可扩散至细胞内,其细胞内水平受 11β- 羟类固醇脱氢酶(1 型或 2 型)的严格调控。本皮质醇检测试剂盒可快速、准确地定量复杂样本中的皮质醇,包括肝微粒体、全细胞和动物血清。该试剂盒还可用于评估 11β- 羟类固醇脱氢酶 1(11β-HSD1)的活性(天然、重组或微粒体来源)。
本试剂盒基于竞争结合原理,包含两种关键试剂:一种是标记穴状化合物(Cryptate,供体)的特异性抗体,另一种是偶联 d2(受体)的皮质醇。细胞产生的皮质醇与 d2 标记的皮质醇会竞争结合铕穴状化合物(Eu Cryptate)标记的抗皮质醇单克隆抗体。(标注:biomarkers-how-it-works-assay-principle-cortisol-62crtpeg-62crtpeh 为图表 / 文件标识,可译为 “生物标志物 - 皮质醇检测原理”)
皮质醇检测采用简化流程,仅需两步孵育:
细胞刺激后,仅需在室温下进行一次 2 小时孵育即可完成检测。(标注:biomarkers-how-it-works-assay-protocol-cortisol-62crtpeg-62crtpeh 为图表 / 文件标识,可译为 “生物标志物 - 皮质醇检测方案”)
(标注:specifications-cortisol-1 为图表 / 文件标识,可译为 “皮质醇检测规格 1”)
本皮质醇试剂盒可准确定量血清、细胞和微粒体制备物等复杂样本中的氢化可的松。图 2 汇总了在 384 孔低体积板中使用 HTRF 皮质醇试剂进行的微粒体 11β-HSD1 检测结果。已知的 11β-HSD1 抑制剂甘草次酸(Glycyrrhetinic acid)和甘珀酸(Carbenoxolone)可阻断可的松向皮质醇的转化,其半数抑制浓度(IC50)分别为 0.33 µM 和 0.31 µM。实验流程:在 384 孔低体积板中,用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH,200 µM)和可的松(160 nM)刺激微粒体 11β-HSD1(0.2 mg/mL),并加入不同浓度的甘草次酸和甘珀酸抑制剂。同时设置已知浓度的皮质醇标准曲线, plates 在 37°C 孵育 2 小时后,加入皮质醇 - d2 偶联物和铕离子穴状化合物(Eu³⁺ Cryptate)标记的抗皮质醇抗体。试剂添加后在室温孵育 4 小时,随后在 620 nm 和 665 nm 波长下读取发射光信号。(标注:assay-validation-cortisol-1 为图表 / 文件标识,可译为 “皮质醇检测验证 1”)