产品概述

颗粒酶 B（Granzyme B）又称组织蛋白酶 G 样 1、细胞毒性 T 淋巴细胞蛋白酶 2、片段素 - 2、颗粒酶 - 2 或人淋巴细胞蛋白，存在于细胞毒性淋巴细胞、自然杀伤（NK）细胞和细胞毒性 T 细胞中。它与穿孔素（Perforin）共同分泌，穿孔素在细胞膜上形成孔道，颗粒酶 B 进入靶细胞胞质，通过激活半胱天冬酶（caspase）触发凋亡。本试剂盒专为快速检测细胞上清液和全细胞中的人源颗粒酶 B 设计，无需洗涤步骤即可实现高通量检测，相比酶联免疫吸附试验（ELISA）节省时间。

工作原理

检测原理

人源颗粒酶 B 检测采用双抗夹心免疫分析技术，使用两种特异性抗人源颗粒酶 B 抗体，分别标记铕穴状化合物（Europium Cryptate，供体）和 d2（受体）。信号强度与样本中颗粒酶 B 的浓度成正比。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-principle-granzyme-b-62hgrzbpeg-62hgrzbpeh.svg 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - 颗粒酶 B 检测原理”）

检测方案

检测采用 384 孔小体积白色板或 Revvity 低体积 96 孔板（终体积 20 µL），操作流程如下：向检测板中直接加入 16 µL 细胞上清液、样本或标准品，随后使用 HTRF 试剂进行检测。标记 HTRF 供体和受体的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，进一步简化检测流程。仅需按比例调整各试剂的添加体积，检测即可在 96 孔至 384 孔板中进行。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-granzyme-b-62hgrzbpeg-62hgrzbpeh.svg 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - 颗粒酶 B 检测方案”）

检测详情

试剂盒技术规格

• 样本量：16 µL
• 最终检测体积：20 µL
• 试剂盒组分：冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及实验方案
• 检测限（LOD）与定量限（LOQ）（稀释液中）：1.8 ng/mL 与 3.7 ng/mL
• 检测范围：3.7–1500 ng/mL
• 出结果时间：室温过夜（ON at RT）

分析性能

颗粒酶 B 标准曲线

按照试剂盒说明书流程，将试剂盒提供的重组颗粒酶 B（标准品）用 5 号稀释液进行系列稀释。以检测得到的 HTRF 信号（以 delta 比值表示）为纵坐标，对应的颗粒酶 B 浓度为横坐标绘制标准曲线。（标注：analytical-performance-human-granzyme-b-1.svg 为图表 / 文件标识，可译为 “人源颗粒酶 B 分析性能 1”）

精密度

批内精密度（n=24）

• 每个样本检测 24 次，计算各样本变异系数（% CV）
• 样本 1：颗粒酶 B 均值 644 pg/mL，变异系数（CV）14%
• 样本 2：颗粒酶 B 均值 438 pg/mL，变异系数（CV）14%
• 样本 3：颗粒酶 B 均值 23 pg/mL，变异系数（CV）18%
• 平均 CV：15%

批间精密度（n=4）

• 每个样本在 4 个独立实验中检测，计算各样本变异系数（% CV）
• 样本 1：颗粒酶 B 含量 10 pg/mL，delta 比值均值 576，变异系数（CV）9%
• 样本 2：颗粒酶 B 含量 54 pg/mL，delta 比值均值 2759，变异系数（CV）6%
• 样本 3：颗粒酶 B 含量 652 pg/mL，delta 比值均值 18940，变异系数（CV）6%
• 平均 CV：7%

检测验证

细胞上清液中颗粒酶 B 的检测（单板方案）

将不同密度（4000 个 / 孔和 2000 个 / 孔）的 TALL-104 细胞（效应细胞）与 K-562 细胞（靶细胞）共培养（或单独培养），在 384 孔小体积微孔板中加入 16 µL 细胞悬液，于 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 16 小时。共培养结束后，加入 4 µL HTRF 颗粒酶 B 检测试剂，室温过夜孵育后读取 HTRF 信号。（标注：assay-validation-human-granzyme-b-1.svg 为图表 / 文件标识，可译为 “人源颗粒酶 B 检测验证 1”）

细胞上清液中颗粒酶 B 的检测（双板方案）

将不同密度（50000 个 / 孔和 25000 个 / 孔）的 TALL-104 细胞（效应细胞）接种到 96 孔板中，加入 50 µL 细胞悬液，与 K-562 细胞（靶细胞）共培养（或单独培养），于 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 16 小时。共培养结束后，取 16 µL 细胞上清液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 颗粒酶 B 检测试剂，室温过夜孵育后读取 HTRF 信号。（标注：assay-validation-human-granzyme-b-2.svg 为图表 / 文件标识，可译为 “人源颗粒酶 B 检测验证 2”）

产品规格

其他规格

• 应用领域：Protein Quantification（蛋白定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：Kit（试剂盒）
• 样本体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：Biomarkers（生物标志物）
• 靶标物种：人（Human）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：Oncology & Inflammation（肿瘤学与炎症）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）