核心结论

HMGB1 检测试剂盒是基于 HTRF 技术的夹心免疫分析工具，可定量人、小鼠、大鼠样本中的高迁移率族蛋白 1（HMGB1），灵敏度高、特异性强，适配炎症、代谢 / 糖尿病、NASH / 纤维化及肿瘤炎症相关研究，能精准捕获坏死性凋亡、焦亡等细胞死亡过程中释放的 HMGB1。

产品概述

高迁移率族蛋白 1（HMGB1）在细胞核内与 DNA 和组蛋白相互作用，决定染色质结构。一旦被释放到细胞外，HMGB1 会作为警报素或损伤相关分子模式（DAMP） 发挥作用，通过结合 Toll 样受体 4（TLR4）启动炎症反应，促进细胞因子产生。坏死、焦亡和凋亡是受调控的细胞死亡方式，均会导致不同形式的 HMGB1 释放，其中焦亡过程中 HMGB1 会与 IL-1β、IL-18 共同释放。HMGB1 与多种自身免疫病病理机制相关，包括类风湿关节炎（RA）和系统性红斑狼疮（SLE）。

工作原理

检测原理

采用夹心免疫分析技术，通过两种特异性抗 HMGB1 抗体实现检测：两种抗体分别标记 HTRF 供体染料和受体染料，样本中 HMGB1 会与抗体形成夹心复合物，信号强度与 HMGB1 浓度呈正比。（标注：1biomarkers-how-it-works-assay-principle-hmgb1-62hmgpeg-62hmgpeh.svg 为图表标识，对应 “HMGB1 检测原理”）

检测流程

• 检测板：384 孔低体积白色板或 Revvity 低体积 96 孔板（终体积 20 µL）
• 样本处理：直接加入 16 µL 细胞上清液、样本或标准品
• 操作简化：HTRF 供体 / 受体标记抗体已预混，单次加样即可完成反应
• 高通量适配：可通过比例调整试剂体积，适配 96 孔至 384 孔板格式

（标注：2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-hmgb1-62hmgpeg-62hmgpeh.svg 为图表标识，对应 “HMGB1 检测方案”）

数据分析

推荐使用 4 参数逻辑（4PL）曲线拟合标准曲线，能在宽浓度范围内准确量化样本，适配生物系统分析。Revvity 与Myassays.com合作提供数据分析支持，可通过对应链接获取免费在线 HMGB1 分析软件。

检测详情

技术规格

• 样本量：16 µL
• 最终检测体积：20 µL
• 出结果时间：室温 2 小时至过夜（from 2h to Overnight at RT）
• 试剂盒组分：冷冻标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及实验方案
• 检测限（LOD）（稀释液中）：0.2 ng/mL
• 定量限（LOQ）（稀释液中）：0.5 ng/mL
• 检测范围：0.78–50 ng/mL
• 适用物种：人（Human）、小鼠（mouse）、大鼠（rat）
• 特异性：不与牛 HMGB1 交叉反应（No cross-reactivity with bovine HMGB1）

分析性能

精密度

批内精密度（n=24）

• 每个样本检测 24 次，计算浓度变异系数（% CV）
• 样本 1：HMGB1 均值 2.4 ng/mL，CV 3.90%
• 样本 2：HMGB1 均值 6.6 ng/mL，CV 4.30%
• 样本 3：HMGB1 均值 18.9 ng/mL，CV 2.80%
• 平均 CV：4.10%

批间精密度（n=4）

• 每个样本在 4 个独立实验中检测，计算浓度变异系数（% CV）
• 样本 1：HMGB1 均值 1.56 ng/mL，delta 比值均值 298，CV 11%
• 样本 2：HMGB1 均值 6.25 ng/mL，delta 比值均值 1468，CV 13%
• 样本 3：HMGB1 均值 25 ng/mL，delta 比值均值 7150，CV 13%
• 平均 CV：12.3%

加标回收

• 实验设计：向含已知浓度 HMGB1 的上清液中添加固定量（10.9 ng/mL）的重组 HMGB1，计算回收率，验证样本基质适用性
• 样本 1：上清液原有 HMGB1 4.1 ng/mL，加标后预期总浓度 15.0 ng/mL，实测 13.4 ng/mL，回收率 89%
• 样本 2：上清液原有 HMGB1 8.2 ng/mL，加标后预期总浓度 19.1 ng/mL，实测 16.1 ng/mL，回收率 84%
• 样本 3：上清液原有 HMGB1 14.4 ng/mL，加标后预期总浓度 25.3 ng/mL，实测 21.3 ng/mL，回收率 84%
• 回收率范围：84%–89%

检测验证

1. HMGB1 标准曲线验证

使用试剂盒提供的重组 HMGB1 标准品，按说明书流程用 5 号稀释液系列稀释，以 delta 比值为纵坐标、HMGB1 浓度为横坐标绘制标准曲线，验证检测线性范围。（标注：3assay-validation-hmgb1-1.svg 为图表标识，对应 “HMGB1 标准曲线验证”）

2. 坏死性凋亡诱导 THP-1 细胞释放 HMGB1

• 实验流程：THP-1 悬浮细胞以 4×10⁵个 / 孔接种，用 25 µM Z-VAD-FMK 处理 1 小时抑制胱天蛋白酶；离心换液后，加入 100 ng/mL TNFα 单独或联合 5 µM cIAP 抑制剂 BV-6 诱导坏死性凋亡；过夜孵育后收集上清液，按试剂盒说明书检测 HMGB1 浓度。

（标注：4assay-validation-hmgb1-2.svg 为图表标识，对应 “坏死性凋亡相关 HMGB1 释放验证”）

3. 焦亡诱导 THP-1 细胞释放 HMGB1

• 实验流程：THP-1 悬浮细胞以 2×10⁵或 4×10⁵个 / 孔接种，用 1 µg/mL LPS 预处理 3 小时；离心换液后，加入 8 µM 尼日利亚菌素（Nigericin）诱导焦亡；过夜孵育后收集上清液，按试剂盒说明书检测 HMGB1 浓度。

（标注：5assay-validation-hmgb1-3.svg 为图表标识，对应 “焦亡相关 HMGB1 释放验证”）

简化通路：焦亡与坏死性凋亡中的 HMGB1 信号通路

1. 焦亡通路（Pyroptosis）

• 启动信号（Priming）：脂多糖（LPS）等微生物分子激活 NF-κB 通路，诱导 NLRP3 炎症小体和前 IL-1β 表达；
• 激活信号（Activation）：胞外 ATP 等危险分子或尼日利亚菌素等抗生素触发 NLRP3 炎症小体激活；
• 下游效应：胱天蛋白酶（caspase）激活，最终释放 HMGB1、IL-1β 和 IL-18。

2. 坏死性凋亡通路（Necroptosis）

• 调控分子：受体相互作用蛋白激酶 1/3（RIPK1/RIPK3）、混合谱系激酶结构域样蛋白（MLKL）及胱天蛋白酶 8；
• 激活流程：TNFα 结合受体，招募 TNFR 相关死亡蛋白（TRADD）和 TNFR 相关因子 2/3（TRAF2/3），进而激活 RIPK1/RIPK3 形成 “坏死小体” 复合物；
• 下游效应：仅释放 HMGB1，不释放 IL-1β 和 IL-18。

（标注：6biomarkers-tab4-hmgb1-simplified-pathway-62hmgpeg-62hmgpeh-62hmgpej.svg 为图表标识，对应 “HMGB1 信号通路简化图”）

产品规格

• 应用领域：Protein Quantification（蛋白定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：Kit（试剂盒）
• 样本体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：Biomarkers（生物标志物）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：Inflammation（炎症）、Metabolism/Diabetes（代谢 / 糖尿病）、NASH/Fibrosis（非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化）、Oncology & Inflammation（肿瘤学与炎症）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）