产品概述

人 c-Myc 是一种多功能转录因子蛋白，参与细胞周期进程、凋亡及细胞转化，还可通过调控组蛋白乙酰化调节整体染色质结构。该试剂盒用于特异性、快速定量细胞中的 c-Myc 原癌基因。

工作原理

检测原理

人 c-Myc 检测采用夹心免疫分析技术，涉及两种特异性抗人 c-Myc 抗体：一种标记铕穴状化合物（Europium Cryptate，供体），另一种标记 d2（受体）。信号强度与样本中 c-Myc 的浓度呈正比。该方案针对 384 孔板格式优化，可轻松缩小或扩大检测规模，仅需少量样本。检测试剂可预先混合，单次加样直接检测，全程无需洗涤步骤。（标注：63adk053peh1.svg 为图表标识，对应 “人 c-Myc 检测原理”）

检测流程

采用双板实验方案：细胞在同一 96 孔培养板中接种、刺激并裂解，随后将裂解液转移至检测板，使用 HTRF 试剂检测人 c-Myc。该方案可监测细胞活力与汇合度。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合，单次加样简化流程，按比例调整试剂体积即可适配 96 孔至 384 孔板格式。（标注：63adk053peh2.svg 为图表标识，对应 “人 c-Myc 检测流程”）

检测验证

HTRF 检测与 Western Blot 对比

HeLa 细胞在 T175 培养瓶中 37°C、5% CO₂条件下培养 48 小时，移除培养基后用 3 mL 补充型裂解缓冲液室温裂解 45 分钟。将细胞裂解液用补充型裂解缓冲液系列稀释，取 10 µL 各稀释液分别进行 Western Blot 和 HTRF 平行检测。结果显示，HTRF c-Myc 检测仅需 1000 个细胞即可获得最低检测信号，而 Western Blot 需 4000 个细胞，HTRF 检测灵敏度至少是 Western Blot 的 4 倍。（标注：assay-validation-human-c-myc-cell-based-3.svg 为图表标识，对应 “与 Western Blot 对比结果”）

多种人细胞系中 c-Myc 的检测

将 100,000 个人 MCF7、A549、HeLa、HTC116 和 HEK293T 细胞接种于 96 孔板，用细胞培养基 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。移除培养基后，加入 50 µL 裂解缓冲液，室温温和振荡裂解 30 分钟。取 10 µL 裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 10 µL HTRF c-Myc 检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。（标注：assay-validation-human-c-myc-cell-based-4.svg 为图表标识，对应 “多细胞系检测结果”）

溴结构域相互作用抑制剂的作用

将 40,000 个 HeLa 细胞接种于 96 孔板，用细胞培养基 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用不同浓度的 JQ1 孵育 24 小时后，移除培养基，加入 50 µL 裂解缓冲液，室温温和振荡裂解 45 分钟。取 10 µL 裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 10 µL HTRF c-Myc 检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。（标注：assay-validation-human-c-myc-cell-based-5.svg 为图表标识，对应 “JQ1 抑制剂作用结果”）

组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂的作用

将 40,000 个 HeLa 细胞接种于 96 孔板，用细胞培养基 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用不同浓度的 TSA 孵育 24 小时后，移除培养基，加入 50 µL 裂解缓冲液，室温温和振荡裂解 45 分钟。取 10 µL 裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 10 µL HTRF c-Myc 检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。（标注：assay-validation-human-c-myc-cell-based-6.svg 为图表标识，对应 “TSA 抑制剂作用结果”）

细胞生长抑制剂的作用

将 10,000 个 HeLa 或 A549 细胞接种于 96 孔板，用细胞培养基 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用不同浓度的抑制剂（U0126、甲氨蝶呤、吉西他滨）孵育 72 小时后，移除培养基，加入 50 µL 裂解缓冲液，室温温和振荡裂解 45 分钟。取 10 µL 裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 10 µL HTRF c-Myc 检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。（标注：assay-validation-human-c-myc-cell-based-7.svg 为图表标识，对应 “细胞生长抑制剂作用结果”）

产品规格

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用（Protein-Protein Interaction）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样本体积：10 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：结合测定（Binding Assay）
• 靶标物种：人（Human）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：肿瘤学与炎症（Oncology & Inflammation）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）