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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Biomarkers > HTRF MDA5 AGGREG. KIT - 100K PTS

产品概述

抗肌萎缩蛋白同源物(Utrophin)是一种常染色体编码的 376 kDa 细胞骨架蛋白,结构和功能与肌营养不良蛋白(dystrophin)相似,广泛表达于各类细胞中,可介导细胞骨架与质膜的锚定。抗肌萎缩蛋白同源物在发育中的肌肉中高表达,且在成熟肌肉的神经肌肉接头处富集。杜氏肌营养不良(Duchenne's muscular dystrophy)患者因缺乏肌营养不良蛋白,抗肌萎缩蛋白同源物会被上调并重新分布至肌营养不良蛋白的正常定位区域。该 HTRF 抗肌萎缩蛋白同源物试剂盒专为快速检测细胞裂解液中的抗肌萎缩蛋白同源物设计。

工作原理

检测原理

抗肌萎缩蛋白同源物的检测采用夹心免疫分析技术,涉及两种特异性抗抗肌萎缩蛋白同源物抗体:一种标记铕穴状化合物(Europium Cryptate,供体),另一种标记 d2(受体)。信号强度与样本中抗肌萎缩蛋白同源物的浓度呈正比。(标注:1biomarkers-how-it-works-assay-principle-utrophin-63adk107peg-63adk107peh.svg 为图表标识,对应 “抗肌萎缩蛋白同源物检测原理”)

检测流程

抗肌萎缩蛋白同源物检测采用双板实验方案:细胞首先在同一培养板中接种、刺激并裂解,随后将裂解液转移至检测板进行抗肌萎缩蛋白同源物检测。该方案可监测细胞活力与汇合度。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合,通过单次加样步骤加入,进一步简化操作流程;按比例调整试剂体积即可适配 96 孔至 384 孔板格式。(标注:2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-alpha-tubulin-63adk072peg-63adk072peh.svg 为图表标识,对应 “抗肌萎缩蛋白同源物检测流程”)

检测验证

HeLa 细胞中抗肌萎缩蛋白同源物的内源性水平检测

将人 HeLa 细胞以不同密度(100K、50K、25K、12.5K、6.25K、3.1K 个细胞 / 孔)接种于 96 孔板,每孔 100 µL 完全培养基,在 37°C、5% CO₂条件下孵育。次日移除培养基,加入 50 µL #3 裂解缓冲液,室温温和振荡裂解 30 分钟。取 16 µL 裂解液转移至低体积白色微孔板,加入 4 µL 预混合的 HTRF 抗肌萎缩蛋白同源物检测试剂,过夜孵育后记录 HTRF 信号。(标注:2assay-validation-utrophin-1.svg 为图表标识,对应 “HeLa 细胞内源性抗肌萎缩蛋白同源物检测结果”)

C2C12 细胞中抗肌萎缩蛋白同源物的内源性水平检测

将小鼠 C2C12 细胞以不同密度(200K、100K、50K、25K、12.5K、6.25K 个细胞 / 孔)接种于 96 孔板,每孔 100 µL 完全培养基,在 37°C、5% CO₂条件下孵育。次日移除培养基,加入 50 µL #3 裂解缓冲液,室温温和振荡裂解 30 分钟。取 16 µL 裂解液转移至低体积白色微孔板,加入 4 µL 预混合的 HTRF 抗肌萎缩蛋白同源物检测试剂,过夜孵育后记录 HTRF 信号。(标注:3assay-validation-utrophin-2.svg 为图表标识,对应 “C2C12 细胞内源性抗肌萎缩蛋白同源物检测结果”)

产品规格

  • 应用领域:蛋白定量(Protein Quantification)
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF(均相时间分辨荧光)
  • 产品类别:试剂盒(Kit)
  • 样本体积:16 µL
  • 运输条件:干冰运输(Shipped in Dry Ice)
  • 靶标类别:生物标志物(Biomarkers)
  • 技术平台:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
  • 治疗领域:罕见病(Rare Diseases)
  • 单位规格:100,000 次检测(100,000 assay points)


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