产品概述

MDA-5（黑色素瘤分化相关基因 5）是一种 RIG-I 样受体，作为细胞质双链 RNA 传感器，在病毒感染识别及抗病毒反应级联激活中发挥核心作用，可诱导 I 型干扰素和促炎细胞因子产生。MDA-5 在执行核酸传感功能时会沿 RNA 链形成聚集体，还能增强自然杀伤细胞功能，并参与多种肿瘤细胞系的生长抑制与凋亡过程。该 MDA-5 检测试剂盒与 MDA-5 聚集试剂盒兼容，可从单个样本中同时分析聚集态和总 MDA-5，提供更全面的检测结果。

工作原理

检测原理

MDA-5 检测用于定量细胞裂解液中 MDA-5 的表达水平，与 Western Blot 不同，该检测为全板基操作，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团，两种抗体均特异性识别蛋白上的不同表位。当细胞提取物中存在 MDA-5 时，加入抗体偶联物后供体与受体荧光团近距离接触，产生 FRET 信号。信号强度与样本中 MDA-5 浓度直接成正比，可通过无洗涤检测格式评估蛋白表达水平。（标注：1biomarkers-how-it-works-assay-principle-mda5-total-63adk112peg-63adk112peh.svg 为图表标识，对应 “MDA-5 检测原理”）

双板检测流程

双板方案流程：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解液转移至 384 孔低体积检测板，再加入 MDA-5 HTRF 检测试剂。该方案可监测细胞活力与汇合度。（标注：2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-alpha-tubulin-63adk072peg-63adk072peh.svg 为图表标识，对应 “MDA-5 双板检测流程”）

单板检测流程

使用 HTRF 试剂检测 MDA-5 可在单个培养板中完成细胞培养、刺激与裂解，无需洗涤步骤。该高通量筛选（HTS）专用方案支持微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。（标注：2phospho-how-it-works-total-btk-1-plate-assay-protocol.svg 为图表标识，对应 “MDA-5 单板检测流程”）

检测验证

聚肌苷酸 - 聚胞苷酸（poly I:C）刺激 HUTU80 细胞后 MDA-5 的聚集检测

将 HUTU80 细胞接种于 96 孔板，用完全培养基在 37°C、5% CO₂条件下孵育。次日，在低血清培养基（0.5% FBS）中用聚肌苷酸 - 聚胞苷酸（HMW）/LyoVec 处理细胞 2 小时（37°C、5% CO₂）。处理后用补充型裂解缓冲液 #3 室温温和振荡裂解 30 分钟，取 16 µL 裂解液分两次转移至低体积白色微孔板，分别加入 4 µL 预混合的 HTRF MDA-5 聚集检测试剂或总 MDA-5 检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。（标注：2assay-validation-mda5-total-1.svg 为图表标识，对应 “MDA-5 聚集检测结果”）

简化通路

MDA-5 的功能与调控机制

MDA-5 作为病毒核酸的细胞质传感器，其配体包括 5' 帽缺乏 2'-O - 甲基化的 mRNA 和长度超过 1 kb 的双链 RNA。结合双链 RNA 后，MDA-5 的折叠状态发生改变并触发聚集；聚集态 MDA-5 进一步结合 MAVS，激活 IKK 相关激酶（TBK1 和 IKBKE），这些激酶磷酸化干扰素调节因子（IRF3 和 IRF7），进而激活抗病毒免疫相关基因的转录，包括 I 型干扰素（IFN-α 和 IFN-β）。（标注：3biomarkers-tab4-mda5-total-simplified-pathway-63adk112peg-63adk112peh-63adk112pej.svg 为图表标识，对应 “MDA-5 简化通路”）

产品规格

• 应用领域：蛋白定量（Protein Quantification）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 分子修饰类型：总蛋白（Total）
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样本体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种：人（Human）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：感染性疾病（Infectious Diseases）、炎症（Inflammation）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）