SARS-CoV-2 N 蛋白(核衣壳蛋白)是冠状病毒寡聚核衣壳的基本单体成分,作为主要免疫原,在病毒感染早期即可大量表达,且感染患者血清中从第一天起就能检测到该蛋白。因此,SARS-CoV-2 N 蛋白是病毒感染的可靠标志物,也是疫苗研发的潜在免疫原候选物。
细胞裂解液中的 SARS-CoV-2 颗粒通过夹心免疫分析技术检测,采用标记铽穴状化合物(terbium-Cryptate)或 d2 的抗核衣壳单克隆抗体,保障检测质量、重复性和信号稳定性。产生的特异性 HTRF 信号与核衣壳蛋白的含量呈正比。(标注:1biomarkers-how-it-works-assay-principle-sars-cov-2-capsid-kit-63adk113peg-63adk113peh.svg 为图表标识,对应 “SARS-CoV-2 N 蛋白检测原理”)
检测采用 384 孔小体积板或低体积 96 孔板(终体积 20 µL),具体流程如下:取 16 µL 细胞裂解液或对照样本直接加入检测板,使用 HTRF 试剂进行检测。标记 HTRF 供体和受体的抗体可预先混合后单次加样(4 µL),也可分别加样(各 2 µL),进一步简化操作流程。(标注:2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-spike-s1-protein-kit-63adk114peg-63adk114peh.svg 为图表标识,对应 “SARS-CoV-2 N 蛋白检测流程”)
取 16 µL 含重组蛋白的 #5 裂解缓冲液加入低体积白色微孔板,随后加入 4 µL 预混合的 HTRF 抗 SARS-CoV-2 核衣壳检测试剂,室温孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。(标注:3assay-validation-sars-cov-2-capsid-kit-1.svg 为图表标识,对应 “重组核衣壳蛋白检测结果”)
(标注:4assay-validation-sars-cov-2-capsid-kit-std.svg 为图表标识,对应 “SARS-CoV-2 N 蛋白标准曲线”)