产品概述

该产品是针对谷胱甘肽 S - 转移酶（GST）制备的 IgG2a 型单克隆抗体，经铕（Eu）标记后形成抗 GST-Eu cryptate 试剂。该抗体可与多种表达载体产生的 GST 标签融合蛋白发生特异性反应，适配生化与细胞两种实验体系，广泛用于研究蛋白 / 蛋白、蛋白 / 多肽、蛋白 / DNA、蛋白 / RNA、蛋白 / 碳水化合物、蛋白 / 小分子、受体 / 配体等多种分子间的相互作用。依托 HTRF 技术，该试剂能够检测解离常数范围从皮摩尔到低毫摩尔的各类亲和力相互作用，满足不同强度分子作用的研究需求。

工作原理

检测原理

在 HTRF 相互作用检测体系中，参与相互作用的两个分子伴侣需分别通过直接或间接的方式标记信号供体与受体，检测信号强度与两个伴侣的结合程度呈正相关。具体应用场景中，抗 GST-Eu cryptate 会特异性结合带有 GST 标记的结合伴侣 A，结合伴侣 B 则与标记了 HTRF 受体的特异性抗体相结合。若结合伴侣 B 经过生物素化、标签标记或 Fc 融合修饰，可选用抗标签、抗种属、蛋白 A、链霉亲和素等对应的 HTRF 受体标记试剂完成检测。（标注：HTRF MAb Anti GST-Eu cryptate 1.svg，对应 “抗 GST-Eu cryptate 检测原理示意图”）

检测流程

以 20 微升最终反应体积，检测 GST 标记的结合伴侣 A 与非标记结合伴侣 B 的相互作用为例，具体操作步骤如下：首先加入 10 微升两种结合伴侣的混合液并完成孵育；随后加入 5 微升抗 GST-Eu cryptate 试剂和 5 微升标记受体的抗结合伴侣 B 抗体；再次孵育后读取荧光信号即可。若结合伴侣 B 为生物素化、标签标记、Fc 融合修饰或直接标记类型，替换为对应的受体标记 HTRF 试剂即可适配检测。（标注：HTRF MAb Anti GST-Eu cryptate 2.svg，对应 “抗 GST-Eu cryptate 检测流程示意图”）

检测详情

检测次数与活性部分的关联

每孔中偶联物的平均含量可反映体系内生物材料的总体含量，实验计量时建议优先参考活性部分的含量，而非偶联物总含量。对于铕 / 铽穴状化合物和 d2 类偶联物，由于标记物分子量极小可忽略不计，偶联物总含量与活性部分含量完全一致；而 XL665 标记的偶联物，其总含量会随 XL665 偶联物的最终摩尔比变化而波动。该试剂的活性部分含量由 Revvity 精准设定，始终保持恒定，且含量与订购的检测次数直接挂钩。（标注：HTRF MAb Anti GST-Eu cryptate 3.svg，对应 “活性部分含量与检测次数关联说明图”）

试剂适配浓度建议

1. 铕穴状化合物偶联物：浓度需严格把控，避免用量过高导致读数仪信号饱和，同时防止背景信号过高干扰实验结果。多数情况下，1-5 纳摩尔的浓度最为适宜，该浓度在兼容 HTRF 的读数仪上，620 纳米波长下可产生 20,000-80,000 计数 / 秒的信号。
2. XL665 偶联物：浓度需尽可能与检测体系中对应的目标物浓度匹配，以保证更多生物分子被 XL665 受体标记。例如，当检测体系中标记分子浓度为 20 纳摩尔时，抗标签 - XL665 的浓度需达到与之等摩尔及以上水平，才能保障检测效果。

检测验证

p53/HDM2 结合实验验证p53 是一种在 DNA 损伤时被激活的肿瘤抑制蛋白，其活性受 HDM2 结合的调控，HDM2 结合后会诱导 p53 发生泛素化介导的降解。基于本试剂搭建的 HTRF 检测体系，可用于监测 p53 与 HDM2 的结合情况、评估 p53 N 端丝氨酸磷酸化对二者结合的影响，以及测定 p53 同源蛋白 p73 与 HDM2 的相对亲和力。该检测体系的核心组分包括位点特异性生物素化 p53 蛋白、GST 融合 HDM2 蛋白、链霉亲和素 - XL665 以及本产品抗 GST-Eu cryptate 抗体。相关实验数据已发表于《Analytical Biochemistry》期刊（Kane et al. 2000, 278: 29-38）。（标注：HTRF MAb Anti GST-Eu cryptate 4.svg，对应 “p53/HDM2 结合实验验证数据图”）

产品规格

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用及多种分子间相互作用研究
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 产品类别：荧光试剂
• 运输条件：常温运输
• 靶标类别：结合检测
• 技术平台：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
• 适用治疗领域：心血管疾病、感染性疾病、炎症、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
• 单位规格：5,000 次检测