概述

工作原理

检测原理

HTRF RIG-I 结合检测采用竞争性实验模式，使用生物素标记的 3' 磷酸双链 RNA、链霉亲和素 - d2、带 6His 标签的人源 RIG-I 蛋白，以及铽穴状化合物标记的抗 6His 抗体。待测化合物会与生物素标记的 3' 磷酸双链 RNA 产生竞争结合，从而阻断荧光共振能量转移（FRET）的发生。

实验流程

人源 RIG-I 结合实验可在 96 孔或 384 孔低体积白色微孔板中进行（终体系 20 微升）。操作如下：将样品或标准品直接加入检测板，随后加入带 His 标签的人源 RIG-I 蛋白，再加入 HTRF 检测试剂，即铽穴状化合物标记的抗 6His 抗体，以及结合了 d2 标记链霉亲和素的生物素化 3' 磷酸双链 RNA。带有 HTRF 荧光基团的试剂可预先混合后一次性加样。实验无需洗涤步骤。通过按比例调整各试剂加样体积，可进一步实现实验体系的微型化或扩大化。

实验验证

5' 三磷酸基团与平末端双链 RNA 对 RIG-I 结合的影响

在 HTRF RIG-I 结合检测中平行测试两种不同的双链 RNA。第一种双链 RNA 的 5' 端带有三磷酸基团，第二种则无。将两种 RNA 分别用稀释液进行梯度稀释，随后加入 RIG-I 蛋白，再加入 HTRF 检测试剂完成最终检测步骤。室温孵育 1 小时后收集结果。结果显示，如预期一致，双链 RNA 5' 端三磷酸基团的存在可提升 RIG-I 蛋白的结合亲和力。

规格

其他参数

应用：蛋白 - 蛋白相互作用

自动化兼容：是

品牌：HTRF

检测方式：HTRF

产品类别：试剂盒

样本体积：5 微升

运输条件：干冰运输

靶点：RIG-I

靶点类型：结合检测

靶点物种：人

技术：TR-FRET

治疗领域：感染性疾病、肿瘤学与炎症

规格：500 次检测