读数前可使用静电吸附膜贴膜（推荐货号： 64TOPSAPRO-50，免撕透光， 兼容 TRF 检测）。

酶标仪为单孔多点数据， 能避免位置因素影响。另外，建议均匀种板。

探针的荧光强度与 pH 值有关。如果探针被排泄到比溶酶体酸性更小的腔室中， 将观察到信 号的减少。

不会自发透膜。可通过 Fab only 组扣除背景。

不能。信号来自整个孔当中，所有细胞上抗体不同内吞阶段的 mix。后续将推出仅在晚期内 体及溶酶体中特异发光的探针。

实验孔探针信号增强主要来自两个方面： 信号随内吞量增加而增强； 信号随内吞进展 pH 降 低而增强。另外，若长时间培养，培养基酸化会导致背景信号增加， 因此，对于不同浓度的待 测抗体均需设置对应的 Fab only 对照，以便扣除背景得到特异性信号。

可参照《pHSense™ setup recommendations for Revvity microplate readers》进行参数设置。 大多数情况下酶标仪 TRF 模式按推荐参数设置可以满足检测需求。因选用的抗体、浓度及培养 体系不同， Delay 时间可以适当延长以减少非特异性信号。

Dose response assay 中，建议以最高浓度点与 pHsense Fab-Eu 孵育（室温孵育 30min）， 后梯度稀释。

12 months (pHSense Eu Fab anti-Human lgG； pHSense Eu Fab anti-mouse IgG2)

pH~6