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GPCR 内吞检测试剂能否兼容商品化细胞系,例如 LgBit 改造后的细胞系?
pHSense Eu 检测试剂可兼容市面上大多数商品化细胞系,但未测试 LgBit 是否会影响内 吞。
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如何降低 GPCR 本底内吞?
可以尝试在 RT 或 4°C 下预孵育细胞,以减缓这一过程。
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在已有验证数据中,为什么 anti-FLAG 给出的信号比 Eu-SNAP 高得多?
Eu-SNAP 标记意味着每个受体只有一个 pHSense Eu 探针。 但是 Eu Anti-FLAG 结合的每个受 体将会有不止一个 Eu 探针。
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Fab 探针是否可以与其他抗标签抗体一起检测受体内化?
原理上可行,建议实验验证。
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针对内源性表达的 GLP1R 受体, 有没有推荐搭配 pHSense Eu Fab 使用的一抗?
针对 Mouse GLP-1R 和 Rat GLP-1R ,推荐"Creative Biolabs, Clone 7F38 https://www.creativebiolabs.net/anti-glp-1r-recombinant-antibody-clone-7f38-140874.htm"
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pHsense Eu 探针的效期?
36 months (SNAP & Anti-FLAG)
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pHsense Eu anti-flag 的分子量?
~ 150KDa
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得到的 620 数据应该如何处理?
计算内化的特异性信号 (Specific 620 signal),用特异性信号计算内化的 EC50
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有无做过血清容忍度测试?高血清检测是否会影响数据?
一般细胞培养的血清含量(小于等于 20%) 不会对实验结果产生影响。且在相同培养基质中获 得的数据是完全可以比较的。
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贴壁细胞可以不用贴壁过夜,直接加探针抗体混合物孵育后检测吗?
通常贴壁细胞需要过夜贴壁以维持正常的生理状态。若通过对比实验,确定贴壁细胞悬浮状 态不影响细胞抗原表达及内吞状态, 就可以直接添加探针抗体混合物。
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