HTRF TAU P-S356 KIT - 50K PTS

概述

工作原理

• 磷酸化 tau 蛋白（Ser356）检测原理
  磷酸化 tau 蛋白（Ser356）检测用于测量在 Ser356 位点发生磷酸化的 tau 蛋白。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转移步骤。

• 磷酸化 tau 蛋白（Ser356）双板检测方案
  双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，之后添加磷酸化 tau 蛋白（Ser356）HTRF 检测试剂。

• 磷酸化 tau 蛋白（Ser356）单板检测方案
  使用 HTRF 试剂检测磷酸化 tau 蛋白（Ser356）可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行。无需洗涤步骤。

检测验证

• 在人 SH-SY5Y 细胞系中，BIO 诱导 GSK3 抑制后对 tau 蛋白 S356 位点磷酸化的评估
  将人 SH-SY5Y 细胞以每孔 100,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时后，用不同浓度的 GSK3α/β 抑制剂 BIO（6 - 溴靛玉红 - 3 - 肟）处理细胞 1 小时，随后用冈田酸（100nM）处理 2 小时，再用花萼海绵诱癌素 A（100nM）处理 10 分钟。然后移除培养基，加入 50µL 补充的 1X 裂解缓冲液。在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟后，将 16µL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中，并添加 4µL HTRF 磷酸化 tau 蛋白（Ser356）或总 tau 蛋白检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

• 在小鼠 Neuro2a 细胞系中，BIO 诱导 GSK3 抑制后对 tau 蛋白 S356 位点磷酸化的评估
  将小鼠 Neuro2a 细胞以每孔 100,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时后，用不同浓度的 GSK3α/β 抑制剂 BIO（6 - 溴靛玉红 - 3 - 肟）处理细胞 1 小时，随后用冈田酸（100nM）处理 2 小时，再用花萼海绵诱癌素 A（100nM）处理 10 分钟。然后移除培养基，加入 50µL 补充的 1X 裂解缓冲液。在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟后，将 16µL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中，并添加 4µL HTRF 磷酸化 tau 蛋白（Ser356）或总 tau 蛋白检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

• HTRF 磷酸化 tau 蛋白（Ser356）检测与蛋白质印迹法的比较
  将人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞接种到 T175 培养瓶的完全培养基中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 2 天。然后用冈田酸（100nM）处理细胞 2 小时，再用花萼海绵诱癌素 A（100nM）处理 10 分钟。处理后，用 3mL 补充的 #1 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。

简化通路

• tau 蛋白在阿尔茨海默病通路中的作用
  tau 蛋白在阿尔茨海默病的发病机制中起着重要作用。它会发生过度磷酸化并聚集，形成细丝，进而可浓缩成神经原纤维缠结。tau 蛋白聚集体可能通过类似朊病毒的方式在细胞间传播，从而加剧病理过程。调节 tau 蛋白过度磷酸化并减少 tau 蛋白聚集的药物是可行的治疗方法。

规格

• 应用：细胞信号传导
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 分子修饰：磷酸化
• 产品类别：试剂盒
• 样品体积：16µL
• 运输条件：干冰运输
• 靶标类别：磷蛋白
• 靶标物种：
  • 人类
  • 小鼠
• 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
• 治疗领域：神经科学
• 单位规格：50,000 个检测点