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  • ALPHA.SF ULTRA TDP43 TOTAL, 500
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ALPHA.SF ULTRA TDP43 TOTAL, 500

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品牌： Revvity

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概述


TAR DNA 结合蛋白 43（TDP-43）是一种参与 RNA 相关代谢的核酸结合蛋白。在病理状态（突变或失调）下，TDP-43 会在脑和脊髓神经元的细胞质中形成不溶性包涵体。聚集的 TDP-43 已被确定为肌萎缩侧索硬化症（ALS）和额颞叶痴呆（FTLD）的标志性特征，并广泛存在于阿尔茨海默病等多种神经退行性疾病中。


AlphaLISA SureFire Ultra 人源总 TDP-43 检测试剂盒是一种采用 Alpha 技术的夹心免疫测定法，用于定量检测细胞裂解物中的总 TDP-43 蛋白。


规格类型

  • 大容量（HV）试剂盒：包含的试剂可在 96 孔板中以 60 微升反应体积进行 100 孔检测。
  • 500 检测点试剂盒：包含的试剂可在 384 孔板中以 20 微升反应体积进行 500 孔检测。
  • 10,000 检测点试剂盒：包含的试剂可在 384 孔板中以 20 微升反应体积进行 10,000 孔检测。
  • 50,000 检测点试剂盒：包含的试剂可在 384 孔板中以 20 微升反应体积进行 50,000 孔检测。


兼容性

AlphaLISA SureFire Ultra 试剂盒适用于：


  • 细胞和组织裂解物
  • 抗体调节剂
  • 生物治疗性抗体


应用领域

Alpha SureFire 试剂盒可用于：


  • 细胞激酶检测
  • 受体激活研究
  • 筛选


规格参数


其他规格

  • 应用：细胞信号传导
  • 自动化兼容性：支持
  • 品牌：AlphaLISA SureFire Ultra
  • 检测方式：Alpha 技术
  • 裂解缓冲液兼容性：裂解缓冲液
  • 分子修饰类型：总量
  • 产品类型：试剂盒
  • 样本体积：10 微升
  • 运输条件：蓝冰运输
  • 靶标：TDP-43
  • 靶标类别：磷酸化蛋白质
  • 靶标物种：人类
  • 技术平台：Alpha 技术
  • 治疗领域：神经科学
  • 单位规格：500 个检测点


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上海普纳生物技术有限公司
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将人 HEK293 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔培养处理板的完全培养基中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。用新制癌菌素、羟基脲、阿霉素和依托泊苷以剂量反应方式在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 2 小时。然后移除培养基，用 50µl 补充的 1 号裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。细胞裂解后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 磷酸化 CHK1（丝氨酸 345）或总 CHK1 检测试剂。在室温下过夜孵育后记录 HTRF 信号。


不同化合物显示出不同的反应。新制癌菌素、羟基脲和依托泊苷可诱导单链断裂（SSB），导致 CHK1 完全磷酸化。倾向于引发双链断裂（DSB）的阿霉素则使 CHK1 部分磷酸化。新制癌菌素、羟基脲、依托泊苷和阿霉素的半数有效浓度（EC50）分别为 1.2µM、0.1mM、3.3µM 和 7.1µM。


此外，新制癌菌素的 80% 有效浓度（EC80）经测定为 3µM，该浓度被用于评估 ATR/CHK1 通路的抑制剂。


另一方面，这 4 种化合物均未影响 CHK1 总蛋白的表达水平。


human-mouse-phospho-CHK1-detection-kit（人 / 小鼠磷酸化 CHK1 检测试剂盒）


human-mouse-phospho-CHK1-detection-kit（人 / 小鼠磷酸化 CHK1 检测试剂盒）

ATR/CHK1 或 ATM/CHK2 通路抑制剂对 CHK1 磷酸化和总蛋白的影响

将人 HEK293 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔培养处理板的完全培养基中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。用 3 种 ATR 或 ATM 通路抑制剂以剂量反应方式在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 2 小时。然后用 3µM 新制癌菌素（EC80）在 37°C、5% CO₂条件下再处理细胞 2 小时。移除培养基，然后用 50µl 补充的 1 号裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。细胞裂解后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 磷酸化 CHK1（丝氨酸 345）或总 CHK1 检测试剂。在室温下过夜孵育后记录 HTRF 信号。


已知咖啡因是一种温和的 ATR/ATM 通路抑制剂，UCN-1 是一种强效 CHK1 抑制剂，而 KU55933 仅是 ATM 通路抑制剂。正如预期，UCN-1 能以高活性（半数抑制浓度（IC50）为 15nM）完全抑制 CHK1 磷酸化，而咖啡因的活性较弱。KU55933 化合物未诱导 CHK1 磷酸化抑制。


另一方面，这 3 种测试化合物均未影响 CHK1 总蛋白的表达水平。


human-mouse-phospho-CHK1-detection-kit（人 / 小鼠磷酸化 CHK1 检测试剂盒）


human-mouse-phospho-CHK1-detection-kit（人 / 小鼠磷酸化 CHK1 检测试剂盒）

HTRF 磷酸化 CHK1（丝氨酸 345）检测与蛋白质印迹法的比较

将 HEK293 细胞在 T175 培养瓶的完全培养基中于 37°C、5% CO₂条件下培养至汇合。


移除培养基后，用 3mL 补充的 1 号裂解缓冲液（1x）在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。


使用补充的 1 号裂解缓冲液（1x）对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 纯样品和每种稀释液转移至 384 孔小体积微孔板中，然后加入 4µL HTRF 磷酸化丝氨酸 345 CHK1 检测试剂。过夜后记录信号。


将等量的裂解物上样到凝胶中，对 HTRF 检测与蛋白质印迹法进行平行比较。


在这些条件下，HTRF 磷酸化丝氨酸 345 CHK1 检测与蛋白质印迹法的灵敏度相当。


human-mouse-phospho-CHK1-detection-kit（人 / 小鼠磷酸化 CHK1 检测试剂盒）


简化通路

ATM/CHK2 和 ATR/CHK1 信号通路

双链断裂（DSBs）或单链断裂（SSBs）是最有害的损伤之一，可能威胁基因组完整性。这类损伤可由细胞代谢物的作用或 DNA 损伤剂（如遗传毒性化合物、化疗药物、紫外线（UV）照射或电离辐射）诱导产生。


DNA 损伤应答（DDR）主要由共济失调毛细血管扩张症突变蛋白（ATM）和共济失调毛细血管扩张症及 Rad3 相关蛋白（ATR）控制，它们是磷酸肌醇 3 - 激酶（PI3K）相关激酶（PIKK）蛋白激酶家族的两个成员。


在应对 DNA 损伤（SSBs）时，ATR–Chk1 通路和复制检查点应答会被激活，介导 G2/M 检查点以阻止细胞周期进程，为 DNA 修复争取额外时间。ATR 通过其相互作用伙伴 ATRIP 被招募到单链 DNA-RPA 复合体处，这会导致 Chk1 磷酸化和激活。CHK1 激活涉及信号转导通路，直至调节 cdc2 / 周期蛋白 B1 活性和控制 Cdc25A。


许多癌症在 G1/S 检查点存在缺陷，包括那些 p53 缺陷的癌症。如果由于 DNA 损伤，G1 检查点缺陷细胞中的 ATR 通路受到抑制，细胞将不会引发细胞周期停滞以进行 DNA 修复，从而导致癌细胞死亡。因此，抑制 ATR 通路已成为一种有吸引力的策略，可选择性地使 p53 缺陷细胞对损伤 DNA 的化疗药物敏感。


创新小分子 Chk1 和 Chk2 抑制剂的鉴定，以及检查点调节新策略与传统放疗和化疗方式相结合的验证，为改善癌症治疗带来了希望。


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