当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF ENOS P-S1177 KIT - 500 PTS 内皮型一氧化氮合成酶磷酸化检测试剂盒– 500测试

/

HTRF ENOS P-S1177 KIT - 500 PTS 内皮型一氧化氮合成酶磷酸化检测试剂盒– 500测试

分享给好友

下载产品资料

rvty_ls_manual_64ENOSS7PEG-64ENOSS7PEH

rvty_ls_sds_64ENOSS7PEG_US rvty_ls_sds_64ENOSS7PEG_UK rvty_ls_sds_64ENOSS7PEG_SPA rvty_ls_sds_64ENOSS7PEG_ITA rvty_ls_sds_64ENOSS7PEG_ELL rvty_ls_sds_64ENOSS7PEG_DEU rvty_ls_sds_64ENOSS7PEG_FRA

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

这种基于 HTRF 细胞的检测方法可便捷、准确地检测丝氨酸 1177 位点磷酸化的内皮型一氧化氮合酶（eNOS）。

eNOS 主要在内皮细胞中表达，其功能是控制血管舒张、血压，以及发挥多种抗动脉粥样硬化和血管保护作用。

丝氨酸 1177 是 eNOS 最重要的磷酸化位点，对其活性具有正向调节作用。丝氨酸 1177 位点的磷酸化受多种激酶调控，包括 AKT、PKA、AMPK、CaMKK2b 和 CHKI。

这种基于 HTRF 细胞的检测方法可便捷、准确地检测丝氨酸 1177 位点磷酸化的 eNOS。

工作原理

磷酸化 eNOS（Ser1177）检测原理

磷酸化 eNOS（Ser1177）检测用于测定丝氨酸 1177 位点磷酸化的 eNOS。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测使用两种抗体，一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且在免洗涤的检测形式下为评估蛋白质的磷酸化状态提供了方法。

phospho-enos-s1177-assay-principle

磷酸化 eNOS（Ser1177）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化 eNOS（Ser1177）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

phospho-enos-s1177-assay-principle

磷酸化 eNOS（Ser1177）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 eNOS（Ser1177）可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

phospho-enos-s1177-assay-principle

检测验证

血清饥饿与磷酸化积累

将人脐静脉内皮细胞（Huvec）以 80% 的汇合度接种到 160mm 培养皿中，在 37°C、5% CO₂条件下培养，进行或不进行过夜血清饥饿处理。然后加入或不加入 30µM 过钒酸盐溶液处理 30 分钟。移除培养基后，向每个培养皿中加入裂解缓冲液，摇晃孵育 30 分钟。随后将 16µl 裂解物转移至 384 孔板中，用于总 eNOS 和 Ser1177 磷酸化 eNOS 的检测。

饥饿处理似乎会导致蛋白质轻微减少，但会使磷酸化水平显著下降。过钒酸盐对磷酸化的积累效果显著。

phospho-enos-s1177-assay-principle

非诺贝特通过 AMPK 通路诱导 eNOS 磷酸化

将人脐静脉内皮细胞以 80% 的汇合度接种到 100mm 培养皿中，在 37°C、5% CO₂条件下培养，并进行过夜血清饥饿处理。然后加入或不加入 30µM 非诺贝特溶液处理 30 分钟。移除培养基后，加入裂解缓冲液。将 16µl 裂解物转移至 384 孔板中，用于总 eNOS 和 Ser1177 磷酸化 eNOS 的检测。

phospho-enos-s1177-assay-principle

磷酸化 eNOS（Ser1177）的蛋白质印迹法与 HTRF 检测比较

将人脐静脉内皮细胞在 160mm 培养皿中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。进行过夜血清饥饿处理后，用 30µM 过钒酸盐孵育 30 分钟。移除细胞培养基后，加入 3mL 补充裂解缓冲液，孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用等量的裂解物进行蛋白质印迹法与 HTRF 检测的平行比较。磷酸化 eNOS（Ser1177）检测的灵敏度高于蛋白质印迹法：HTRF 检测仅需 37,500 个细胞 /mL 即可检测到，而蛋白质印迹法则需要 75,000 个细胞 /mL。

phospho-enos-s1177-assay-principle

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管、代谢 / 糖尿病
单位规格：500 个检测点

没有数据

没有数据

货号：64ENOSS7PEG

一键复制

参考价格 ¥ 29723.99

产品规格

1盒/500测试￥29723.99

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价

相关靶点蛋白推荐

上海普纳生物技术有限公司