肌球蛋白(Myosins)是基于肌动蛋白的马达蛋白,为真核细胞收缩力的产生提供支持。每个肌肉肌球蛋白组装体包含一对肌球蛋白重链(MYH)和两对肌球蛋白轻链(MYL)。肌球蛋白重链 2(MyHC-2)属于 II 类(传统型)肌球蛋白重链家族,在骨骼肌收缩中发挥功能。该检测试剂盒可检测细胞裂解液中的肌球蛋白重链,适用于骨骼肌疾病相关研究。
肌球蛋白重链的检测采用夹心免疫分析技术,涉及两种特异性抗肌球蛋白重链抗体:一种标记铕穴状化合物(Europium Cryptate,供体),另一种标记 d2(受体)。信号强度与样本中肌球蛋白重链的浓度呈正比。(标注:2biomarkers-how-it-works-assay-principle-myosin-heavy-chain-63adk098peg-63adk098peh-63adk098pej.svg 为图表标识,对应 “肌球蛋白重链检测原理”)
肌球蛋白重链检测采用双板实验方案:细胞在同一 96 孔培养板中接种、刺激并裂解,随后将裂解液转移至检测板进行肌球蛋白重链检测。该方案可监测细胞活力与汇合度。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合,通过单次加样步骤加入,进一步简化操作流程;按比例调整试剂体积即可适配 96 孔至 384 孔板格式。
在含不同比例胎牛血清(FBS)或马血清(FS)的培养基中培养 C2C12 细胞,诱导 C2C12 成肌细胞分化为肌管。孵育 4 天或 8 天后,吸弃培养基,加入 1× 裂解缓冲液,室温温和振荡裂解 30 分钟。取 16 µL 裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板,加入 4 µL 肌球蛋白重链检测试剂,室温过夜孵育后记录 HTRF 信号。(标注:3assay-validation-myosin-heavy-chain-1.svg 为图表标识,对应 “C2C12 细胞检测结果”)